[PDA배지 만들기]

안녕하세요 나칠라 입니다.
오늘은 PDA(potato Dextrose Agar)를 만들어 볼 거예요!
처음에 potato??감자? 내가 아는 감쟈...?
진짜 감자더라고요.... 다른 블로그 포스팅 된 거 보니깐, 진짜 감자로 만들더라구욬ㅋㅋㅋ(신기방기)
감자로 만드는 방법은... 나... 아중에 해볼께용...
 

식품공전 4.미생물 시험법 > 4.4.1 배지

 

PDA란?

곰팡이와 박테리아를 키우는데 가장 널리 사용됩니다. 그래서 식품산업에서 식품을 부패시킬 수 있는 곰팡이를 테스트하는데 많이 사용됩니다. 제약 산업에서는 약물의 잠재적인 항 진군제를 선별하는 데 사용된다고 합니다.

빠른 실험방법 설명 (Difco사용)

준비물: PDA배지, 주석산, 증류수, 실린지필터(멸균된 것), 주사기(멸균된 것)
주석산 투입 전 배지 만드는 방법
1. PDA배지 가루 채취
2. 121 ºC 15m 오토클레이브
3. 45~50 ºC 가량까지 식히고, 10% 주석산 투입
4. PH확인
5. 사용

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10% 주석산 만드는 방법
1. 100ml 물 + 10g 주석산
2. 가루가 안 보일 때까지 흔들어서 녹이기
※주석산을 투입하는 이유: PDA배지를 산성화 시켜, 곰팡이 이외에 잡균을 억제하기 위해서 넣습니다!

상세 실험설명 (Difco사용)

주석산 투입 전 배지 만드는 방법

1. PDA배지 가루 채취

형광펜 칠 한 것을 보면, 1L에 39g을 넣어라고 합니다. 저는 800ml를 만들기 때문에, 24.96g을 넣어 줍니다!
원하는 증류수의 양을 소수점으로 바꿔준다.
ex) 800ml -> 0.8
1L 기준의 양 g과 소수점으로 바꾼 g 수를 곱한다.
ex) 39*0.8 = 24.96g

증류수 사용하기

알갱이가 안 보일 때까지 흔들어서 녹여줍니다.

 

2. 121 ºC  15min 오토클레이브

 

3. 45~50 ºC 가량까지 식히고, 10% 주석산 투입

배지온도를 45~50ºC로 맞춰준다.

천천히 여과시켜 주석산 투입 후, 잘 섞이게 흔들어 줍니다.

 

4. PH 맞추기 (PH3.5)

페트리디쉬에 배지를 조금 따르고  PH농도를 맞추시면 됩니다.
PH를 측정할 수 있는 기계들이 있겠지만, 배지가 굳기 때문에.... 띠지를 사용해 줄 거예요!!

 

PH 3과 동일함을 확인! (살짝 연하긴 하지만 ㄱㅊ)

 
★꿀팁
만약 PH측정이 어렵다면, 
비커 100ml당 1.8ml씩 넣어 주면 3.5가 맞춰집니다. (거의ㅎ)
 

5. 사용

배지를 사용하시면 됩니다~
사용하실 때, 당일 제조 * 당일 사용 하셔야 됩니다.
혹 당일 제조하였는데 당장 사용을 안 하시는 경우에는 항온수조나 45~50 ºC 드라이오븐에 보관하셔도 됩니다.
 

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10% 주석산 만드는 방법
1. 100ml 물 + 10g 주석산

메스실린더 사용.

 
2. 가루가 안 보일 때까지 흔들어 녹이기

가루가 안보일때 까지 섞어!!!!!!!!

투명해진  10%주석산

 

실린지 필터 (sytinge filter) 사용하는 방법

준비물: 실린지필터 (0.2um, 주사기)
 
제가 다니는 회사에 연구원님 말씀을 들어보니 실린지 필터를 사용하지 않아도 된다고 하시더라고요~
하지만 저는 보다 정확한 실험을 위해 실린지 필터를 사용합니다!
 

주사기 부리에 필터를 꽂아주면 끝!

주사기 당기고, 배지에 넣기

멸균된 빈 주사기와 멸균된 실린지 필터를 합체시켜 줍니다.
 

여. 기. 서

 
실린지 필터란? (sytinge filter) 
고온과 수증기로 멸균을 할 수 없는 시약들을 여과시켜 멸균을 시켜주는 실험기구랍니다~(멸균되었다고 가정)
제조사에 문의한 결과, 미생물의 크기는 대부분 0.2um이라고 합니다.그래서 0.2um구멍크기의 필터를 사용해서  미생물을 걸러내면 좋겠죠?

 

실린지 필터 특징 1. 무조건 일회용 이다. 2. 0.2, 0.5um등 다양한 pore size가 있다. 3. 주사기가 필요하다. 4. 오토클레이브처럼 가열 멸균이 불가능 할 때, 사용된다.